近年來，淡水水體富營養(yǎng)化引起的藻類大量繁殖及相關(guān)藻毒素污染已在世界范圍內(nèi)被廣泛報道。微囊藻毒素(microcystins，MCs)是由微囊藻屬、魚腥藻屬等藻類產(chǎn)生的有毒代謝產(chǎn)物，其分布廣、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、毒性強，可通過飲用水、水產(chǎn)品和農(nóng)作物等途徑進入人體，對肝臟、腎臟、生殖系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等具有毒性效應，對人體健康構(gòu)成嚴重威脅。
MCs具有親水性，在水中溶解度最高可達1 g/L。同時，MCs具有很強的耐熱性，在300 ℃條件下仍能保持較長時間不分解，加之耐酸堿，一旦自來水和食品發(fā)生MCs污染，高溫烹調(diào)和煮沸等加工過程均不易將其破壞和去除，食品安全即無法保障。大量研究表明，MCs能夠在螺類、貝類、魚、蝦等多種水產(chǎn)品中積累并沿食物鏈轉(zhuǎn)移。
因此，急需開發(fā)用于檢測食品中MCs的快速監(jiān)測工具和改善食品中降解MCs的技術(shù)，以保護公眾健康和確保食品安全與質(zhì)量。
檢測微囊藻毒素有哪些方法呢
目前對MCs的檢測有很多方法,如高效液相色譜(HPLC)、薄層層析法(TLC)、質(zhì)譜(MS)、聚合酶鏈反應(PCR)法 ,酶聯(lián)免疫吸附試驗( ELISA)以及蛋白磷酸酶抑制試驗 (protein phosphatase inhibition assay , PPIA)等。其中高效液相色譜 - 紫外檢測(HPLC-UVD) 和質(zhì)譜法(LC-MS)設(shè)備昂貴 ,大量的同源物卻只有很小范圍可選擇作為標準。且這些方法還需要高素質(zhì)的工作人員 ,微囊藻毒素含量 ≤1mg/L 的檢測極限則需要對樣品進行預濃縮。而酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)是利用抗原抗體反應檢測標本中微量物質(zhì)的方法 ,由于具有簡單、快速、靈敏、低成本等優(yōu)勢 ,越來越受到廣泛的關(guān)注。
關(guān)于酶標抗體法
國家標準《水中微囊藻毒素的測定 GB/T 20466—2006》規(guī)定了高效液相色譜法和間接競爭酶聯(lián)免疫吸附法測定水中微囊藻毒素(環(huán)狀七肽)的條件和詳細分析步驟?！妒称钒踩珖覙藴?水產(chǎn)品中微囊藻毒素的測定 GB 5009.273—2016》中規(guī)定了，水產(chǎn)品微囊藻毒素(環(huán)狀七肽)的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜和間接競爭酶聯(lián)免疫吸附的測定方法。下面我們介紹一下酶聯(lián)免疫吸附法在檢測微囊藻毒素中的運用。
酶標抗體法，又名酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbent assay，簡稱ELISA)，酶聯(lián)免疫吸附法是一項把抗原抗體的免疫反應和酶的高效催化作用原理有機結(jié)合起來的一種檢測技術(shù)。該技術(shù)的主要依據(jù)有三點 : (1) 抗體吸附在固相載體表面后 ,仍具有和抗原產(chǎn)生免疫反應的特性;(2)抗原和酶結(jié)合后所形成的結(jié)合物(酶標抗原),仍具有免疫反應特性和酶的催化特性;(3)酶標抗原和抗體結(jié)合后,結(jié)合物中的酶 ,能催化底物生成有色物質(zhì),且顏色的深淺,可作為判定抗原含量的依據(jù)。
檢測MCs的ELISA主要有三種基本類型:抗原抗體復合物酶聯(lián)免疫法(IC ELISA),間接競爭酶聯(lián)免疫法( Indirect cELISA)和直接競爭酶聯(lián)免疫法( direct cELISA)。雷臘梅等對水樣、藻樣及水產(chǎn)品中MCs的濃度進行了測定。結(jié)果表明 ,抗原抗體復合物酶聯(lián)免疫法靈敏度最高,以單抗包被酶標板,整個測樣時間需要2.5h。直接競爭 ELISA 方法靈敏度相對較低,但操作最為簡單,測樣時間只需1.5h。也基于這一原因 ,所以目前在市場上可購買的MCs檢測試劑盒多采用直接競爭ELISA方法。
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